實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time PCR）是通過(guò)對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板進(jìn)行定量及定性分析靴患。實(shí)時(shí)熒光定量PCR避免了傳統(tǒng)PCR以終產(chǎn)物檢測(cè)定量產(chǎn)生的偏差，提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性,無(wú)需電泳,具有快速及能定量等特點(diǎn)而倍受青睞年扩。該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化蚁廓、比較不同組織的mRNA 表達(dá)差異、驗(yàn)證基因芯片和siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果厨幻。

       上海博封生物承接Real Time PCR法進(jìn)行課題研究的技術(shù)服務(wù)相嵌。提供引物設(shè)計(jì)/合成、檢驗(yàn)方案况脆、標(biāo)準(zhǔn)品制備饭宾、熒光PCR檢測(cè)、數(shù)據(jù)分析及完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告一條龍服務(wù)格了。

服務(wù)特色

• 專(zhuān)業(yè)的技術(shù)服務(wù)：提供實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)看铆、基因序列查找、引物/探針設(shè)計(jì)盛末；

• 可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：ABI 7500 Fast/ Biorad CFX 96熒光PCR儀弹惦、進(jìn)口配套試劑、復(fù)孔實(shí)驗(yàn)悄但；

• 完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告：助您輕松分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果棠隐；

• 配套的增值服務(wù)：如客戶(hù)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有疑惑，我們將為您提供報(bào)告解讀和結(jié)果討論服務(wù)檐嚣；

（一）服務(wù)項(xiàng)目

    1助泽、**定量
    2、相對(duì)定量
    3嚎京、構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品

（二）檢測(cè)方法
    1嗡贺、SYBR Green 染料法
    2、Taqman探針?lè)?/span>

（三）服務(wù)內(nèi)容
    1鞍帝、引物設(shè)計(jì)與合成
    2诫睬、DNA or RNA提取
    3、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
       使用設(shè)計(jì)合成的引物帕涌，以客戶(hù)提供的Total RNA樣品為模板岩臣，進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)，確認(rèn)引物模板的反應(yīng)性能宵膨。然后將模板進(jìn)行5個(gè)濃度梯度稀釋?zhuān)谱鳂?biāo)準(zhǔn)曲線，以供進(jìn)一步定量分析使用炸宵。
    4辟躏、Real Time PCR反應(yīng)及定量分析
       對(duì)客戶(hù)提供的樣品進(jìn)行Real Time RT-PCR反應(yīng)，并進(jìn)行定量分析土全。用相對(duì)定量方法進(jìn)行定量分析時(shí)捎琐，如客戶(hù)需要会涎，可對(duì)管家基因等參比基因進(jìn)行同樣操作，用所得到的值進(jìn)行RNA量的校正瑞凑，**求得目的基因的相對(duì)表達(dá)量末秃。

（四）樣本要求
    1、進(jìn)行mRNA表達(dá)量分析時(shí)籽御，請(qǐng)保證所送樣本是足量的并且保證純度的Total RNA（濃度在100 ng/ml以上练慕，體積在20ul以上)。如果目的基因表達(dá)量低時(shí)技掏，應(yīng)盡量提供更高濃度的Total RNA铃将。
    2、如果提供的材料為細(xì)胞或組織哑梳，DNA劲阎、RNA的提取費(fèi)用另收。同時(shí)應(yīng)保證材料新鮮鸠真，動(dòng)物細(xì)胞數(shù)為10⁶以上悯仙，動(dòng)植物組織為50mg以上。

（五）提供結(jié)果
    1吠卷、qPCR引物及其序列（包括探針）锡垄；
    2、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）撤嫩；

（六）圖例

     圖I. 擴(kuò)增曲線圖

       圖2. 熔解曲線圖